生物化學科Biochemistry080003
AsqJ酵素活性庫之篩選並探討其專一性與反應性之改變 Taiwan
非血基質鐵/α-酮戊二酸依賴型雙氧化酶為巨大酵素家族,其在生物體內進 行許多重要反應。我們選用小巢狀麴菌之 AsqJ 蛋白,其與 Fe2+ 及 α-酮戊二酸能 催化 cyclopeptin 的去飽和、環氧化,形成 cyclopenin。根據 AsqJ 蛋白結構,我 們將與受質結合的 9 個胺基酸位置以不同鹼基對隨機取代,以轉譯不同胺基酸, 構築酵素活性庫,送入大腸桿菌篩選並觀察 AsqJ 突變蛋白分解非典型受質之表 現。 我們成功篩選出能分解 X-Gal 之 AsqJ 突變株,代表我們能以改變 AsqJ 特 定位置胺基酸,進而改變其活性位點,並分解與原先截然不同的受質,故此篩 選平台深具生化技術應用潛力。我們並進一步將上述突變株進行純化、晶體培 養及結構解析,以釐清反應機制,並與奈米抗體結合以增強活性。目前正嘗試 分解環境汙染物結構相似物,期望對環境做出貢獻。